理工類畢業論文(例文)

時間：2020-10-09 07:45:25　來源：勤學考試網本文已影響人

理工類畢業論文(范文)

本科生畢業論文

GSH對低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體AsA-GSH循環代謝的影響

黃秀琴

學院：環境與生命科學系

專業：生物技術

班級： 061 學號： 610303104 指導教師：吳敏生

職稱（或學位）：副教授

2010年6月

原創性聲明

本人鄭重聲明：所呈交的論文（設計），是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經注明引用的內容外，本論文（設計）不含任何其他個人或集體已經發表或撰寫過的作品成果。對本論文（設計）的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。

學生簽名：年月日

指導聲明

本人指導的同學的畢業論文（設計）題目大小、難度適當，且符合該同學所學專業的培養目標的要求。本人在指導過程中，通過網上文獻搜索及文獻比對等方式，對其畢業論文（設計）內容進行了檢查，未發現抄襲現象，特此聲明。

指導教師簽名：年月日

1 引言 (2)

2 材料與方法 (2)

2.1 供試材料 (2)

2.2 主要試劑與儀器 (2)

2.3 測定項目與方法 (2)

2.4 數據分析 (3)

3 結果與分析 (3)

3.1 GSH對低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體GSH含量的影響 (3)

3.2 GSH對低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體AsA含量的影響 (3)

3.3 GSH對低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體中MDHAR活性的影響 (3)

4 討論 (3)

5 結論 (4)

致謝 (4)

參考文獻 (4)

附錄 (5)

GSH對低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體

AsA-GSH循環代謝的影響

黃秀琴

（環境與生命科學系指導教師：吳敏生）

摘要：探討GSH在提高枇杷(Eriobotrya japonica Lindl.)幼果抗寒性方面的應用。以3年生“早鐘6號”枇杷(Eriobotrya japonica Lindl.cv. Zaozhong NO.6)容器苗為試材，研究不同質量濃度谷胱甘肽(GSH)處理對﹣3℃條件下枇杷幼果葉綠體AsA-GSH循環代謝的影響及其在抗低溫脅迫中的作用。低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體抗氧化劑還原型谷胱甘肽(GSH)和抗壞血酸(AsA)含量下降, 多種重要酶的活性受到不同程度的抑制。采用GSH處理可顯著提高低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體GSH等的活性，促進AsA-GSH循環，在枇杷幼果抵抗低溫脅迫中發揮作用。關鍵詞：葉綠體; 還原型谷胱甘肽(GSH); 低溫脅迫; AsA-GSH循環代謝

Effects of GSH on AsA-GSH Circulation Metabolism in Chloroplasts of Young Loquat Fruits Under Low Temperature Stress

Huang Xiuqin

（Environment and Life Science Department, Supervisor: Wu MinSheng）

Abstract: The paper studied the application of reduced glutathione (GSH) in increasing the chilling resistance abilities of young loquat (Eriobotrya japonica Lindl.cv. Zaozhong NO.6) fruits. The container seedling of three-year-old loquat were treated with 100, 300 and 500 mg·L-1 of GSH. The study was to investigate the effects of exogenous GSH on AsA-GSH circulation metabolism in chloroplasts of young loquat fruits under low temperature stress, and its effects on the resistance to low temperature stress. The results showed that the contents of GSH and ascorbic acid(AsA) in chloroplasts decreased while the activities of some important enzymes also decreased when the young loquat fruits were under low temperature stress. The treatment with 100 mg·L-1 of GSH on young loquat fruits could significantly improve the GSH, AsA contents and APX, GR, MDHAR activities. Furthermore, the treatment promoted AsA-GSH circulation metabolism, and improved the ability of free radicals to scavenge in chloroplasts. The results demonstrated that exogenous GSH played a role in the low temperature stress resistance of young loquat fruits.

Keywords: chloroplast; reduced glutathione (GSH); low temperature strees; AsA-GSH circulation metabolism

1 引言

枇杷（Eriobotrya Japonica Lindl）是福建省的地方名特優果品。[1]枇杷品種為耐寒性較差的熱帶型品種，低溫脅迫是熱帶型枇杷品種生長的關鍵限制性因子。近年我國南方山地枇杷產區都有不同程度的凍害發生。熱帶型枇杷在我國現有枇杷栽培面積和產量中占有較大的比重，研究當前枇杷生產上存在枇杷幼果受凍的突出問題以減少因凍害造成的損失具有一定的實際意義和理論價值。谷胱甘肽(GSH)是植物體內普遍存在的還原性物質，在防御自由基對膜脂的過氧化中起到重要作用。相關研究表明，生物膜是低溫脅迫對植物造成傷害的原初作用部位和反應部位，臨界低溫下膜上類脂發生由液晶相向凝膠相的轉變，并引發如膜透性增大和膜結合酶活化能增高等繼發反應，導致組織不可逆傷害的發生。[2, 3]關于GSH對低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體AsA-GSH循環代謝影響的研究未見相關報道。本試驗擬采用不同質量濃度的外源GSH處理低溫脅迫下枇杷幼果，探討外源GSH處理對葉綠體AsA-GSH循環代謝的影響，以期為GSH在提高枇杷幼果抗寒性方面的應用提供理論依據。

2 材料與方法

2.1 供試材料

以“早鐘6號”三年生枇杷容器苗為試材，選取長勢一致、無病蟲害與損傷、生長正常、花后60 d 的枇杷容器苗(已疏果)，以100、300、400和500 mg·L-1等不同質量濃度的GSH (分別在表中標記為T1、T2、T3與T4) 溶液100 mL均勻噴施于葉面和幼果，以無低溫脅迫噴清水處理為對照1 (CK1)，以低溫脅迫加噴清水處理為對照2 (CK2)。每個處理5株。將經GSH處理和CK2容器苗置于人工氣候室-3℃低溫下處理6 h，后于室溫下平衡10 h，迅速取下幼果經液氮速凍后保存于-40℃低溫冰箱，待測相關指標，見表1。

表1 試驗條件

GSH質量濃度

溶液標記對照1 對照2 備注

（mg·L-1）

100 T1 ………

300 T2 ………

400 T3 ………

500 T4 ………

注：以無低溫脅迫噴清水處理為對照1 (CK1)，以低溫脅迫加噴清水處理為對照2 (CK2)

2.2 主要試劑與儀器

本試驗使用的牛血清白蛋白(Albumin，Fraction V）、磷酸緩沖液、三氯乙酸(TCA)、考馬斯亮藍G-250、30%過氧化氫、L-半胱氨酸、β-巰基乙醇、乙二胺四乙酸(EDTA)、Tris-HCl緩沖液、還原型谷胱甘肽(GSH)、抗壞血酸(AsA)和NaCl等試劑為國產分析純或生物級試劑。主要儀器有：MDF-U4086S型超低溫冰箱(日本三洋)、5415R型Eppendorf冷凍離心機(德國產)和Eppendorf移液槍(德國產)等。

2.3 測定項目與方法

2.3.1 葉綠體的制備

參考崔彬彬等(2006)的方法提取完整葉綠體[10]。以緩沖液(含0.05 mol·L-1的磷酸緩沖液PBS，5.0 mmol·L-1的EDTA，pH 7.8)懸浮葉綠體，用于測定APX、GR、MDHAR和DHAR活性以及GSH和AsA

含量。

2.3.2 GSH 和AsA 含量測定

取葉綠體懸浮液1.0 mL ，加1.5 mL 蒸餾水和5%三氯乙酸溶液2.5 mL 混勻，于6600 rpm 離心10 min ，上清液定容至5.0 mL ，用于測定GSH 含量，GSH 含量測定參照Ellman(1959)的方法。取葉綠體懸浮液1.0 mL 于2600 rpm 離心10 min ，沉淀用于制備10%葉綠體勻漿液(葉綠體重量/生理鹽水體積為1: 9)，用于測定AsA 含量，AsA 的測定參照陳建勛等(2002)的方法。[4]

2.4 數據分析

上述測定均設3次獨立試驗，每次3個重復。測定所得數據經Duncan’s 新復極差法進行方差分析, 檢驗差異顯著性。

3 結果與分析

3.1 GSH 對低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體GSH 含量的影響

谷胱甘肽是植物體內重要的抗氧化劑與氧化還原勢的調節劑。由圖1可知，經GSH 處理的枇杷幼果葉綠體中GSH 含量均高于CK2，差異達顯著水平(P ＜0.05)。說明GSH 處理可提高低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體中GSH 的含量，其中以100 mg·L -1的GSH 處理的枇杷幼果葉綠體GSH 含量極顯著高于CK1和CK2以及300 mg·L -1和500 mg·L -1的GSH 處理(P ＜0.01)。CK1枇杷幼果葉綠體的GSH 含量高于CK2，差異達顯著水平(P ＜0.05＝，表明低溫脅迫降低了枇杷幼果葉綠體GSH 含量。

3.2 GSH 對低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體AsA 含量的影響

AsA 在APX 的參與下清除細胞內的H 2O 2，減輕低溫脅迫等逆境條件下引發的膜脂的過氧化傷害。經GSH 處理的幼果葉綠體AsA 含量均高于CK2，差異達顯著水平(P ＜0.05)。其中以100 mg·L -1的GSH 所處理的幼果葉綠體中AsA 含量最高，但300 mg·L -1和500 mg·L -1的GSH 所處理的枇杷幼果葉綠體中AsA 含量低于CK1 (圖2)。

理工類畢業論文(范文)

CK1: 無低溫脅迫的0 mg.L -1 GSH 處理；CK2: 經低溫脅迫和0 mg.L -1 GSH 處理；T1: 經低溫脅迫和100 mg.L -1 GSH

處理; T2: 經低溫脅迫和300 mg.L -1 GSH 處理; T3: 經低溫脅迫和500 mg.L -1 GSH 處理;下同。

3.3 GSH 對低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體中MDHAR 活性的影響

細胞內MDHA 在MDHAR 的作用下被還原成AsA ，使AsA 得以再生，推動AsA-GSH 的循環代謝。 ……

4 討論

細胞內活性氧自由基的積累使膜脂質過氧化作用加強, 是低溫脅迫導致細胞傷害與死亡的重要機

制之一，胞內H2O2在正常情況下可通過Halliwell-Asada途徑清除[5]。此反應所產生的氧化型谷胱甘肽(GSSG)又可在谷胱甘肽還原酶(GR)的催化下被還原成GSH；另一部分MDHA則被單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR，EC 1.6.5.4)還原為AsA。[18]

GSH作為AsA-GSH循環代謝的重要組成部分參與或直接清除胞內活性氧自由基, 谷胱甘肽還原酶(GR，EC 1.6.4.2)的活性影響到胞內GSH庫的水平，植物對環境脅迫的抵抗能力與該酶活性的變化密切相關。[2,7, 8, 9]本試驗研究發現，100 mg·L-1的外源GSH處理可顯著提高低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體GSH 含量和GR活力(P＜0.05)；較高濃度(300和500 mg·L-1)的外源GSH處理對GR活力表現出強烈的抑制作用(即低于CK2)，但它們的GSH含量卻高于CK2，這可能與葉綠體吸收外源GSH導致其含量上升繼而對GR起抑制作用有關。[18]

5 結論

葉綠體中高含量的GSH能促進葉綠體AsA-GSH循環，使葉綠體內AsA含量增加以及APX、MDHAR 和GR活性相應提高[19]。本研究結果表明，采用100 mg·L-1的外源GSH處理可提高低溫脅迫下枇杷幼果葉綠體中抗氧化劑GSH和AsA含量以及APX、GR和MDHAR的活性，這些非酶抗氧化物質與酶之間的協調作用，促進AsA-GSH循環，葉綠體清除自由基的能力增強，維持葉綠體內較低的膜脂過氧化水平，可能與提高枇杷幼果的抗寒性有關。

致謝：

我的畢業論文試驗讓吳老師花費大量的心血，在此感謝吳敏生教授在試驗方面的耐心指導與幫助；同時我還要感謝李露露老師還有其他老師和同學的熱心幫助與支持。

參考文獻：

[1] 陳建勛,王曉峰.植物生理學[M].3版.廣州:華南理工大學出版社,2002:122-126.

[2] 宋松泉,程紅焱,龍春林.種子生物學研究指南[M].北京:科學出版社,2005.

[3] 華春,王仁雷,劉友良.外源GSH對鹽脅迫下水稻葉綠體活性氧清除系統的影響[J].植物生理與分子生物學學報,

2003,29(5):415-420.

[4] 魯麗麗,劉耕,李君,等.GSH對二色補血草鹽害緩沖機理的研究[D].福州:福建農林大學果樹研究所,2010.

[5] 林琳,姜微波,曹健康,等.谷胱甘肽處理對采后鴨梨果實黑心病和抗氧化代謝的影響[R].北京:中國農業大學熱帶果

樹研究院,2006.

[6] 李美茹.低溫下水稻幼苗葉片細胞膜膜脂過氧化和膜磷脂脫酯化反應[C] //中國果樹論壇(2010):枇杷技術交流.北

京:中國農業出版社,2009:27-30.